产品货号：
JN3033
中文名称：
sgRNA体外筛选试剂盒
英文名称：
sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit
产品规格：
30T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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CRISPR/Cas9是一种来源于细菌获得性免疫的由RNA指导Cas9蛋白对靶向基因进行编辑的技术。CRISPR/Cas9的切割是通过向导RNA(gRNA)与打靶基因组位置之间～20bp碱基的配对，且打靶序列的3'端需要有PAM结构(NGG)，再引导Cas9作用实现的。CRISPR/Cas9与靶位点识别的特异性主要依赖于gRNA与靠近PAM处10～12bp碱基的配对，而其余远离PAM处8～10bp碱基的错配对靶位点的识别影响不明显，这导致了CRISPR/Cas9存在一定的脱靶性，可能发生非特异性切割，引起基因组非靶向位点的突变，这样会造成研究结果的不确定性以及研究工作量的大量增加。
我公司的CRISPR/Cas9基因编辑系统能有效解决这一问题。sgRNA体外转录试剂盒（JN3032）能体外高效转录不同的sgRNA片段，进一步通过sgRNA体外筛选试剂盒（JN3033）筛选出高效率的sgRNA，用于后续科研实验。
- 准确筛选高效sgRNA；
- DNA编辑后基因型鉴定。
| 组分 | 规格 |
| Cas9 Nuclease（1μg/μL） | 60μL |
| 10×Reaction Buffer | 60μL |
| 2×Amplification Mix | 1mL |
| 1.5Kb Target DNA Control（50ng/μL） | 20μL |
| Control sgRNA（1μg/μL） | 20μL |
| RNase-Free Water | 1mL |
保存：-20℃
图1．Cas9核酸内切酶DNA片段切割活性。
带有靶位点的DNA片段：6100bp；
酶切后的片段：3900bp和2200bp。
提取基因组DNA，设计引物使用2×Amplification Mix PCR扩增得到含有编辑位点的目的片段后进行体外切割。
- 按下表加入各成分配制体外切割体系：
成分 用量 1.5kb Target DNA Control 200ng Control sgRNA 200ng Cas9 Nuclease 0.5～1μL 10×Reaction Buffer 2μL RNase-Free Water 至20μL - 37℃反应1h。
- 70℃加热10min终止反应。
- 琼脂糖胶电泳检测。
| 货号 | 名称 | 说明 |
| JN0065 | NLS-Cas9 Nuclease | |
| JN3003 | Cas9 D10A Nickase | 能在与sgRNA靶序列互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。 |
| JN3004 | Cas9 H840A Nickase | 能在与sgRNA靶序列非互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。 |
| JN3005 | Cas9(D10A,H840A)Nuclease | 为Cas9 D10A和H840A双突变失活酶，具有靶DNA结合活性，但无切割活性，可用于阴性对照等用途。 |
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